地表水、地下水以及污水中的聯(lián)苯胺檢測(cè)多采用高效液相色譜法其原理是水樣通過(guò)陽(yáng)離子交換固相萃取柱時(shí),聯(lián)苯胺就會(huì)被吸附,這時(shí)可以用乙酸溶液將聯(lián)苯胺鎖定在固相萃取柱上,然后再用甲醇淋洗除去雜質(zhì),接著用氨水甲醇溶液進(jìn)行洗脫,洗脫液濃縮定容后,用具有熒光檢測(cè)器的高效液相色譜分離檢測(cè)。根據(jù)保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。

檢測(cè)所用試劑及儀器

實(shí)驗(yàn)試劑

1.鹽酸:1.19g/mlo

2.冰醋酸:1.05g/ml。

3.氨水:0.91g/ml，優(yōu)級(jí)純。

4.氫氧化鈉。

5.硫代硫酸鈉。

6.乙酸銨:色譜純。

7.聯(lián)苯胺:99.6%。

8.甲醇:液相色譜純。

9.乙醇。

10.乙腈:液相色譜純。

11.鹽酸溶液:1+1。

12.甲醇水溶液:1+1。

13.乙酸銨溶液:0.01mol/L。

  稱(chēng)取0.77g乙酸銨，用水溶解后，稀釋定容至1L。

14.乙酸溶液:3+97。

  量取3ml冰醋酸和97ml水，混勻后備用。

15.氫氧化鈉溶液:1mol/L。

  稱(chēng)取4g氫氧化鈉，用水溶解后，稀釋至100ml。

16.氨水甲醇溶液:5+95。

  量取5ml氨水和95ml甲醇,混勻后備用。

17.聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液:1000ug/ml。

  稱(chēng)取0.050g（精確到0.1mg）聯(lián)苯胺于50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋定容至標(biāo)線，轉(zhuǎn)移至內(nèi)襯聚四氟乙烯墊的螺口棕色試劑瓶中保存。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年。也可直接購(gòu)買(mǎi)市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。

18.聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)中間液:100ug/ml。

  準(zhǔn)確移取1.00ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容至標(biāo)線。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存1年。

19.聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液I:10.0ug/ml。

  準(zhǔn)確移取1.00ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)中間液于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標(biāo)線。此溶液在4C以下冷藏、避光可保存3個(gè)月。使用前，應(yīng)放至室溫并混勻。

20.聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液II:1.00ug/ml。

  準(zhǔn)確移取1.00ml聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液I于10ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀釋定容至標(biāo)線。臨用現(xiàn)配。

21.固相萃取柱:混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱，填料為苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯樹(shù)脂，150mg/6ml，或其他等效萃取柱。

22.濾膜:0.45pm聚四氟乙烯濾膜。

23.氮?dú)?純度≥99.99%。

檢測(cè)儀器設(shè)備

1.高效液相色譜儀:具熒光檢測(cè)器。

2.色譜柱:填料粒徑為5pm，柱長(zhǎng)15cm，內(nèi)徑4.6mm的C18反相色譜柱，或其他等效色譜柱。

3.樣品瓶:500ml具磨口塞的棕色細(xì)口玻璃瓶或帶聚四氟乙烯襯墊的棕色螺紋口玻璃瓶。

4.微量注射器:10ul、50ul和100ul。

5.氮吹儀。

6.超聲波清洗儀:輸出功率在180W以上，工作頻率為40kHz。

7.固相萃取裝置。

檢測(cè)水樣采集

  采樣前向樣品瓶中加入硫代硫酸鈉，每500ml樣品加入40mg。采樣時(shí)，應(yīng)使樣品充滿(mǎn)采樣瓶，不留液上空間。如果樣品的pH不在6-9之間，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6-9。采集的樣品應(yīng)在4℃以下冷藏、避光保存，5d內(nèi)萃取。萃取后的洗脫液在4℃以下冷藏、避光保存，4d內(nèi)分析完畢。

水樣的制備

1.固相萃取柱的活化

  將固相萃取柱固定在固相萃取裝置上，先用5ml甲醇以約2ml/min的流速通過(guò)固相萃取柱，在填料暴露于空氣之前，向柱上加5ml水，待水剩約2ml時(shí)，停止活化。

2.富集、凈化與濃縮

  量取150ml水樣置于250ml錐形瓶中，以約2ml/min的流速通過(guò)活化后的固相萃取柱，水樣完全富集后，加入5ml乙酸溶液，待乙酸溶液完全流出后，加入8ml甲醇淋洗，待甲醇完全流出后，繼續(xù)用真空泵抽吸5min。用7ml氨水甲醇溶液洗脫，洗脫液收集到濃縮瓶中。然后將濃縮瓶置于氮吹儀上，在60℃濃縮至1ml，再用水定容至2.0ml，混勻后經(jīng)濾膜過(guò)濾到棕色水樣瓶中，待測(cè)。

3.空白試樣的制備

  用實(shí)驗(yàn)用水代替水樣，按照與試樣的制備相同步驟進(jìn)行空白試樣的制備。

具體檢測(cè)步驟

1.色譜參考條件

  流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：乙酸銨溶液；洗脫程序?yàn)榈榷认疵摚鲃?dòng)相A/流動(dòng)相B=20/80（V/V），流速：1.0ml/min；柱溫：40℃；激發(fā)波長(zhǎng)：292nm，檢測(cè)波長(zhǎng)：395nm；進(jìn)樣體積：40.0ul。

2.建立校準(zhǔn)曲線

  分別取適量的聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液Ⅰ或聯(lián)苯胺標(biāo)準(zhǔn)使用液Ⅱ，用甲醇水溶液稀釋?zhuān)苽渲辽?個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，聯(lián)苯胺的質(zhì)量濃度分別為2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L、50.0ug/L、100ug/L、200ug/L（此為參考濃度）。按照色譜參考條件，由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣，以聯(lián)苯胺的質(zhì)量濃度（ug/L）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。

3.水樣的測(cè)定

  被檢測(cè)水樣及空白試樣可以按照與校準(zhǔn)曲線的建立相同的條件進(jìn)行試樣的測(cè)定。

  最后定性分析也可根據(jù)水樣中聯(lián)苯胺化合物與標(biāo)準(zhǔn)系列中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間進(jìn)行定性，可采用不同波長(zhǎng)下的熒光強(qiáng)度比輔助定性，必要時(shí)用高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)。而定量分析可以按照相關(guān)的公式進(jìn)行計(jì)算。

以上內(nèi)容來(lái)源于《HJ 1017-2019 水質(zhì) 聯(lián)苯胺的測(cè)定 高效液相色譜法》

  水質(zhì)檢測(cè)